<rt id="8q8em"></rt>
<dl id="8q8em"><acronym id="8q8em"></acronym></dl>
  • <rt id="8q8em"></rt><code id="8q8em"><xmp id="8q8em"></xmp></code>
    <dl id="8q8em"></dl>
    <li id="8q8em"></li>
    <code id="8q8em"><wbr id="8q8em"></wbr></code>
  • <button id="8q8em"><input id="8q8em"></input></button>
  • <code id="8q8em"><wbr id="8q8em"></wbr></code>
  • 国产欧美精品区一区二区三区-亚洲AV无一区二区三区久久-国产无遮挡A片又黄又爽-来一水AV@lysav

    銷售熱線

    19126518388
    • 技術(shù)文章ARTICLE

      您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 消滅 PCR 非特異性擴增的方法

      消滅 PCR 非特異性擴增的方法

      發(fā)布時間: 2023-06-28  點擊次數(shù): 1159次
      非特異性擴增,即進行 PCR 所擴增出來的條帶不是所要的,引物與模板在非目的條帶處有錯配,導(dǎo)致延伸產(chǎn)物不是目的條帶。例如引物二聚體,即引物在退火過程中產(chǎn)生了 hairpin 結(jié)構(gòu)或其他二級結(jié)構(gòu),或者引物在模板的某些位置非特異性地結(jié)合,也同樣會產(chǎn)生非特異性擴增。PCR 產(chǎn)物都是通過引物延伸產(chǎn)生的。當(dāng)引物產(chǎn)生了二聚體或者非特異性擴增產(chǎn)物之后,引物本身就無法再延伸形成 PCR 產(chǎn)物了,這樣的情況下,非特異性擴增產(chǎn)物越是多,那目的產(chǎn)物就越是少。如果在 qPCR 過程中,就會在熔解曲線中形成雙峰。

      消滅 PCR 非特異性擴增的方法:
      1、引物設(shè)計的過程中要用 Primer premier 5.0 來驗證一下二聚體;
       
      2、 引物合成后,先做一次梯度 PCR,檢測最合適的退火溫度,一般高退火溫度可以提高引 物對模板的特異性從而降低引物二聚體;
       
      3、 降低 Mg2+濃度,鎂離子濃度高,會導(dǎo)致大量的非特異性擴增,但是沒有鎂離子的話,也會導(dǎo)致 Taq 酶的失活;
       
      4、降低 dNTP 濃度,dNTP 也是非特異性擴增的一個罪魁禍首,降低它的濃度,也能有效降低二聚體及其他非特異性擴增;
       
      5、降低引物濃度,一般的 PCR 引物都是過量的,降低了引物濃度自然也能降低引物之間形成二級結(jié)構(gòu)的可能性;
       
      6、提高退火溫度,這個道理很簡單,引物的退火溫度提高,引物間的二級結(jié)構(gòu)形成可能性就會降低;
       
      7、延長退火時間,這個也可以減弱引物間結(jié)合的可能性;
       
      8、DMSO 及甜菜堿,這些 PCR 促進劑,主要是用于 CG 含量高的模板上,降低 DNA 的二級結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生,但根據(jù)經(jīng)驗,加入 DMSO 之后需要同時提高一點退火溫度來補平(qPCR 不太適用);
       
      9、熱啟動法,通過 95℃的高溫?zé)釂?,高溫解鏈,使得引物間的二級結(jié)構(gòu)破壞,以此降低二聚體產(chǎn)生。


      深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。


    產(chǎn)品中心 Products
    成人无码精品1区2区3区免费看 | 女女女女BBBBBB毛片在线| 免费精品人在线二线三线区别| 99精产国品一二三产区| 国产精品99久久免费观看| 色综合99久久久无码国产精品| 亚洲AV毛片一区二区三区| 亚洲AV在线观看| 久久丫精品国产亚洲AV| 无码人妻一区二区三区在线| 国产女人AAA级久久久级| 国产精品揄拍100视频| 日韩精品无码一本二本三本色| 国产麻豆一精品一AV一免费| 国产SUV精品一区二区| 精品国产乱码久久久久久1区2区| 我强行与岳的性关系| 337P粉嫩大胆色噜噜噜| 无码久久精品国产亚洲AV影片| 精品久久久久成人码免费动漫| 精品少妇人妻AV一区二区三区 | 国产后入清纯学生妹| 国产特级毛片AAAAAA| 成人欧美一区二区三区黑人| 3D动漫精品啪啪一区二区免费| 人人摸人人操| 国产成人精品无码一区二区 | 久久人妻熟女一区二区| 成人免费毛片AAAAAA片| 亚洲精品国产电影| 欧美极品JIZZHD欧美| 亚洲av高清一区二区三区| 久久99精品国产麻豆不卡| 久久精品国产亚洲AV麻豆| 久久久久久久人妻无码中文字幕爆| A片人人澡C片人人人妻| 最新69成人国产精品视频免费| 少妇高潮毛片免费看| 成人毛片18女人毛片免费| 爆乳熟妇一区二区三区霸乳| 国产免费视频|